Pengasingan virus adalah proses penting dalam penyelidikan virologi, diagnostik klinikal, dan pembangunan vaksin. Centrifuge yang disejukkan memainkan peranan penting dalam proses ini, membolehkan pemisahan zarah virus dari komponen lain dalam sampel. Sebagai pembekal sentrifugasi yang berkualiti tinggi, saya berpengalaman dalam prosedur untuk menggunakan instrumen ini dalam pengasingan virus. Dalam blog ini, saya akan membimbing anda melalui langkah -langkah tertentu yang terlibat.
1. Penyediaan sampel
Sebelum menggunakan centrifuge yang disejukkan untuk pengasingan virus, penyediaan sampel yang betul adalah penting.
Koleksi sampel
Langkah pertama ialah mengumpul sampel yang sesuai. Ini termasuk cecair biologi seperti darah, air liur, atau homogenat tisu. Sebagai contoh, dalam hal virus pernafasan, swab nasofaring biasanya digunakan. Apabila mengumpul sampel, teknik aseptik yang ketat harus diikuti untuk mencegah pencemaran.
Homogenisasi (jika perlu)
Jika sampel adalah tisu, ia mungkin perlu homogen untuk melepaskan zarah virus. APengadun Homogenizerboleh digunakan untuk tujuan ini. Homogenisasi memecah struktur tisu dan memastikan bahawa virus itu sama rata dalam penggantungan. Selepas homogenisasi, sampel biasanya ditapis melalui penapis halus untuk mengeluarkan serpihan besar.
Penambahan buffer
Penampan yang sesuai ditambah kepada sampel untuk mengekalkan keseimbangan pH dan osmotik. Penampan ini juga boleh mengandungi inhibitor protease untuk mencegah kemerosotan protein virus. Pilihan penampan bergantung kepada jenis virus yang diasingkan dan kaedah analisis seterusnya.
2. Memuatkan sentrifuge yang disejukkan
Sebaik sahaja sampel disediakan, sudah tiba masanya untuk memuatkannya ke dalam centrifuge yang disejukkan.
Memilih pemutar yang betul
Langkah pertama dalam memuatkan centrifuge ialah memilih pemutar yang sesuai. Rotor yang berbeza mempunyai kapasiti yang berbeza dan direka untuk jenis sampel dan keperluan pemisahan tertentu. Untuk pengasingan virus, pemutar sudut tetap atau rotor baldi berayun boleh digunakan. Tetap - Rotor sudut lebih sesuai untuk zarah virus pelleting, sementara berayun - rotor baldi lebih baik untuk sentrifugasi kecerunan kepadatan.
Mengimbangi sampel
Pengimbangan adalah langkah kritikal dalam menggunakan centrifuge. Beban yang tidak seimbang boleh menyebabkan getaran yang berlebihan, merosakkan centrifuge, dan menyebabkan keputusan yang tidak tepat. Sampel harus diletakkan dalam tiub dengan saiz yang sama dan diisi dengan jumlah yang sama. Sekiranya perlu, tiub dummy yang dipenuhi dengan jumlah penampan yang sama boleh digunakan untuk mengimbangi beban.
Memuatkan tiub
Berhati -hati meletakkan tiub seimbang ke dalam slot pemutar. Pastikan tiub duduk dengan betul dan dijamin. Kencangkan tudung pemutar untuk mengelakkan sebarang kebocoran semasa sentrifugasi.
3. Menetapkan parameter sentrifugasi
Langkah seterusnya adalah untuk menetapkan parameter sentrifugasi yang sesuai pada centrifuge yang disejukkan.
Kelajuan
Kelajuan sentrifugasi ditentukan oleh saiz dan ketumpatan zarah virus. Umumnya, kelajuan yang lebih tinggi diperlukan untuk zarah virus yang lebih kecil. Bagi virus yang paling biasa, kelajuan antara 10,000 hingga 30,000 revolusi seminit (rpm) digunakan. Walau bagaimanapun, untuk virus yang sangat kecil atau untuk sentrifugasi kecerunan ketumpatan, bahkan kelajuan yang lebih tinggi mungkin diperlukan.
Masa
Tempoh sentrifugasi juga bergantung kepada virus dan kaedah pemisahan. Masa sentrifugasi yang lebih pendek digunakan untuk langkah -langkah penjelasan awal, manakala masa yang lebih lama diperlukan untuk pelleting zarah virus. Biasanya, masa sentrifugasi boleh berkisar dari beberapa minit hingga beberapa jam.
Suhu
Oleh kerana banyak virus sensitif terhadap suhu, centrifuge yang disejukkan digunakan untuk mengekalkan suhu rendah semasa sentrifugasi. Suhu biasanya ditetapkan antara 2 - 8 ° C untuk mengelakkan inaktivasi virus.
4 Proses sentrifugasi
Setelah parameter ditetapkan, mulakan proses sentrifugasi.
Memantau centrifuge
Semasa sentrifugasi, adalah penting untuk memantau centrifuge untuk memastikan ia berjalan lancar. Semak sebarang bunyi atau getaran yang luar biasa, yang mungkin menunjukkan beban yang tidak seimbang atau masalah mekanikal. Kebanyakan sentrifugasi sejuk moden dilengkapi dengan sensor dan penggera untuk mengesan isu -isu tersebut.
Penyiapan sentrifugasi
Apabila sentrifugasi selesai, centrifuge akan berhenti secara automatik. Tunggu pemutar untuk berhenti sepenuhnya sebelum membuka tudung centrifuge. Ini penting untuk mengelakkan sebarang tumpahan atau kerosakan pada sampel.
5. Post - Pengendalian sentrifugasi
Selepas sentrifugasi, sampel perlu ditangani dengan teliti untuk mendapatkan virus terpencil.
Pemisahan supernatan dan pelet
Sekiranya tujuan sentrifugasi adalah untuk melepaskan zarah virus, berhati -hati mengeluarkan supernatan dari tiub menggunakan a5000ul micropipet. Supernatan mengandungi komponen dan serpihan larut, manakala pelet di bahagian bawah tiub mengandungi zarah virus.
Resuspensi pelet
Pelet virus kemudiannya diselamatkan semula dalam jumlah penampan yang kecil. Langkah ini memerlukan pipet lembut untuk mengelakkan merosakkan zarah virus. Virus yang diselamatkan boleh disucikan atau dianalisis lagi.
Kawalan kualiti
Adalah penting untuk melakukan kawalan kualiti pada virus terpencil. Ini termasuk mengukur titer virus menggunakan teknik seperti ujian plak atau tindak balas rantai polimerase kuantitatif (qPCR). APenganalisis kelembapan untuk makananjuga boleh digunakan untuk memastikan kandungan lembapan yang betul dari sampel semasa penyimpanan.
6. Penyimpanan virus terpencil
Penyimpanan virus terpencil yang betul adalah penting untuk mengekalkan daya majunya.
Membekukan virus
Virus terpencil biasanya dibekukan pada suhu ultra - rendah, seperti - 80 ° C atau dalam nitrogen cecair. Pembekuan membantu memelihara virus untuk penyimpanan jangka panjang. Walau bagaimanapun, adalah penting untuk menambah cryoprotectants kepada penggantungan virus untuk mengelakkan kerosakan semasa proses pembekuan.
Pelabelan dan dokumentasi
Setiap sampel virus hendaklah dilabelkan dengan maklumat seperti nama sampel, tarikh pengasingan, dan jenis virus. Dokumentasi proses pengasingan, termasuk parameter sentrifugasi dan hasil kawalan kualiti, juga penting untuk rujukan masa depan.
Kesimpulan
Menggunakan centrifuge yang disejukkan dalam pengasingan virus melibatkan satu siri langkah -langkah yang ditakrifkan dengan baik, dari penyediaan sampel ke pengendalian dan penyimpanan sentrifugasi. Sebagai pembekal sentrifugasi yang disejukkan, kami memahami pentingnya menyediakan instrumen berkualiti tinggi yang dapat memenuhi keperluan khusus pengasingan virus. Centrifuges kami direka dengan ciri -ciri canggih seperti kawalan suhu yang tepat, keupayaan kelajuan tinggi, dan antara muka yang mesra pengguna untuk memastikan pengasingan virus yang tepat dan cekap.
Sekiranya anda terlibat dalam penyelidikan pengasingan virus atau kerja diagnostik dan mencari sentrifuge yang boleh dipercayai, kami dengan senang hati akan membantu anda. Pasukan pakar kami dapat memberi anda maklumat terperinci tentang produk kami dan membantu anda memilih sentrifuge yang tepat untuk keperluan anda. Hubungi kami hari ini untuk memulakan perbincangan perolehan dan mengambil kerja pengasingan virus anda ke peringkat seterusnya.
Rujukan
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Biologi molekul sel. Sains Garland.
- Mahy, BWJ, & Van Regenmortel, MHV (Eds.). (2009). Ensiklopedia meja virologi umum. Akhbar Akademik.
- Murphy, FA, Fauquet, CM, Bishop, DHL, Ghabrial, SA, Jarvis, AW, Martelli, GP, ... & Zerbini, FM (2012). Taksonomi Virus: Laporan Kesembilan Jawatankuasa Antarabangsa mengenai Taksonomi Virus. Elsevier.